AMAÇ ve KAPSAM
Soya fasulyesinden elde edilen ürünlerin üreaz aktivitesini tayin etmek.

PRENSİP
Öğütülmüş analiz numunesinin tamponlu üre çözeltisi ile karıştırılması , 30 ^oC de 30 dakika bekletilmesi , açığa çıkan amonyağın HCl çözeltisinin fazlasında tutulması , asidin fazlasının ayarlı bir NaOH çözeltisi ile geri titrasyonu esasına dayanır.

ALET EKİPMAN
•Genel laboratuvar cihaz ve malzemeleri
•Hassas laboratuvar terazisi
•Değirmen , fazla ısınmadan öğütme yapabilen
•Elek ,200 µm delik açıklığında
•Cam Tüp ( Ağzı tıraşlı,cam kapaklı,18 mm. çaplı ve 150 mm. uzunluğunda )
•pHmetre (0,02 pH duyarlılığında
•Su banyosu , 30 ^oC ±0,5 ^oC de tutulabilen.
•Kronometre

KİMYASALLAR
•0,1 N Hidroklorik Asit Çözeltisi
• 0,1 N Sodyum hidroksit Çözeltisi , ayarlı
•Tamponlanmış üre çözeltisi (pH’sı 6.9 - 7.0 olan) : 4.45 g disodyum hidrojenfosfat dihidrat ( Na2HPO4.2H2O ) ve 3.40 g potasyum dihidrojenfosfat (KH2PO4) suda çözülür ve 1 litreye tamamlanır. Bu tampon çözeltide 30 g üre (NH2CONH2) çözülür. ( Bu çözelti 1 ay süre ile bozulmadan kullanılabilir)

İŞLEM
Yaklaşık 10 g numune , tamamı 200 µm lik elekten geçecek şekilde öğütülür.
( % 10 dan fazla yağ içeren örneklerin , soğuk ekstraksiyon ile önceden yağı alınmalıdır. )
( Üreaz aktivitesi yüksek ürünlerde numune miktarı 0,05 g a kadar düşürülebilir. )
Tayin :
Yaklaşık 0,2 g numune 0,1 mg hassasiyette tartılarak bir deney tüpüne aktarılır. Üzerine 10 mL tamponlanmış üre çözeltisi eklenir. Tüp hemen kapatılarak kuvvetlice çalkalanır. Deney tüpü 30 ^oC ±0,5 ^oC lik su banyosuna yerleştirilir ve kronometre çalıştırılarak tam 30 dakika bu sıcaklıkta bekletilir. Süre sonunda 10 mL 0,1 N HCl çözeltisi ilave edilir ve 20 ^oC ye hızla soğutulur. Tüp içeriği bir behere aktarılır ve tüp birkaç kez saf su ile yıkanarak yıkama suları da behere alınır. Bir pH metre yardımı ile ve ayarlı bir 0,1 N NaOH çözeltisi ile pH=4,70 ‘e kadar titre edilir. ( V1 )
Tanık Deney:
Deney tüpüne 10 mL tamponlanmış üre çözeltisi ve 10 mL 0,1 N HCl alınır. Tayinde kullanılan miktarda ve 0,1 mg hassasiyette tartılmış deney numunesi derhal bu tüpe ilave edilir. Tüp kapatılır ve kuvvetlice karıştırılır. Deney tüpü 30 ^oC ± 0,5 ^oC deki su banyosuna alınır ve kronometre ile kontrol edilerek tam 30 dakika bu sıcaklıkta kalması sağlanır. Süre sonunda tüp 20 ^oC ye soğutularak tüp içeriği bir behere aktarılır ve birkaç kez saf su ile yıkanarak yıkama suları da behere alınır ve 0,1 N NaOH çözeltisi ile pH 4,70’ e kadar titre edilir. ( V0 )

HESAPLAMA
Üreaz aktivitesi 1 g üründen 1 dakikada açığa çıkan mg azot miktarı olarak verilir ve aşağıdaki gibi hesaplanır.

Üreaz Aktivitesi = [14 x ( V0 – V1 ) x f x N] / (30 x m) mg Azot/dakika 30 ^oC de

N: Titarsyonda kullanılan NaOH çözeltisinin normalitesi
f : Titrasyonda kullanılan NaOH çözeltisinin faktörü
V1 : Esas denemede sarf edilen 0,1 N sodyum hidroksit , mL
V0 : Kör denemede sarf edilen 0,1 N sodyum hidroksit , mL
m : Analiz numunesinin kütlesi , g
Numunenin yağı alınarak analiz edilmişse formülden bulunan sonuç (100-Y) / 100 oranı ile çarpılmalıdır.
Burada Y; numuneden alınan yağın kütlece % miktarıdır.
Üreaz aktivitesi kuru madde üzerinden verilmek istenirse formülden bulunan sonuç 100 / ( 100 – R ) oranı ile çarpılmalıdır. Burada R; numunenin kütlece rutubet yüzdesidir )

Kaynak : ISO 5506 / 2002